作者macicine (Mr.Big)
看板Biotech
標題[求救] 紅血球做免疫螢光染色一直卡關
時間Wed May 18 17:12:39 2011
不好意思，因為並非生物背景，
因為要補data印證AFM結果，
所以必須作紅血球的免疫螢光染色，
目標物是細胞骨架～
我先把步驟po上，請各位專家幫我看看哪裡出了問題。
1.將分離後的紅血球以0.5% Formalin-PBS固定
2.用PBS wash x2
3.以0.1% Triton X-100-PBS 打洞
4.用PBS wash x2
此時我就遇見了問題，
因為紅血球也是懸浮細胞，
所以我易開使都是在試管中做，
經由離心wash，會出現RBC pellet~
但是當我加了X-100後，離心wash後卻沒有pellet存在....
請問我是哪步驟做錯了?
其實我看了paper試了很多方法，
從一開使3.7% Formalin-PBS會讓RBC結塊....整個不能用
或者是不加Formalin-PBS，直接加X-100....也不行
可否請各位有做過血球染色的專家幫幫忙～
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.11.175
1F：→ williamyang:可以先用cytospin打到玻片之後,再往下做IF. 05/19 09:12
2F：→ williamyang:我白血球是這麼做,紅血球我就沒試過了 05/19 09:13
3F：→ jsi:或許可用血液抹片 大部分是紅血球 但不知是否適用於螢光染色 05/20 02:43
4F：→ macicine:try了cytospin~還不賴。另一問題出現，加了X-100後... 05/20 15:28
5F：→ macicine:在OM下卻都看不到RBC.....是什麼問題呢？X-100的問題？ 05/20 15:29
6F：→ williamyang:我是用methanol固定加打洞,沒試過X-100. 05/21 10:32