作者macicine (Mr.Big)
看板Biotech
标题[求救] 红血球做免疫萤光染色一直卡关
时间Wed May 18 17:12:39 2011
不好意思，因为并非生物背景，
因为要补data印证AFM结果，
所以必须作红血球的免疫萤光染色，
目标物是细胞骨架～
我先把步骤po上，请各位专家帮我看看哪里出了问题。
1.将分离後的红血球以0.5% Formalin-PBS固定
2.用PBS wash x2
3.以0.1% Triton X-100-PBS 打洞
4.用PBS wash x2
此时我就遇见了问题，
因为红血球也是悬浮细胞，
所以我易开使都是在试管中做，
经由离心wash，会出现RBC pellet~
但是当我加了X-100後，离心wash後却没有pellet存在....
请问我是哪步骤做错了?
其实我看了paper试了很多方法，
从一开使3.7% Formalin-PBS会让RBC结块....整个不能用
或者是不加Formalin-PBS，直接加X-100....也不行
可否请各位有做过血球染色的专家帮帮忙～
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.11.175
1F：→ williamyang:可以先用cytospin打到玻片之後,再往下做IF. 05/19 09:12
2F：→ williamyang:我白血球是这麽做,红血球我就没试过了 05/19 09:13
3F：→ jsi:或许可用血液抹片 大部分是红血球 但不知是否适用於萤光染色 05/20 02:43
4F：→ macicine:try了cytospin~还不赖。另一问题出现，加了X-100後... 05/20 15:28
5F：→ macicine:在OM下却都看不到RBC.....是什麽问题呢？X-100的问题？ 05/20 15:29
6F：→ williamyang:我是用methanol固定加打洞,没试过X-100. 05/21 10:32