作者waitingu (Phil-Ku)
看板Biotech
標題[求救] 請問Random primer的設計...
時間Wed May 18 10:58:20 2011
最近在clone一個大小約5000bp的gene，但設計了兩三次不同的primer
或是用不同的Taq，始終只能Amplify出大概2000bp大小的band
跟同學討論的結果，可能是因為我們的方法是cell line的mRNA轉cDNA時，用oligo dT
RT的步驟做不完全長，所以她建議用random primer去做RT
想請問一下大家，這種primer是去買廠商製備好的(像是Promega是她推薦的)
或是可以自己請明欣或是基龍米克斯合成呢？(因為經費不太夠)
而大家有經驗用來cloning長片段的基因嗎？效果如何？
感謝大家^^
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◆ From: 140.112.121.97
1F：推 leoblack:hexamer跟commercial買就好啦~ 05/18 12:09
2F：推 gerpy:如果只是要Clone一個基亞，因去設計一個10bp以內的specific 05/18 19:29
3F：→ gerpy:primer 去做RT，效果會比random primer跟dT好，又更長！ 05/18 19:30
4F：→ gerpy:基亞，因=基因(打太快，請去掉"亞，") 05/18 19:31
5F：推 abcam:這種Random primer 和 siRNA 的序列 我們lab都是請QIAGEN 05/19 23:29
6F：→ abcam:原廠來設計的也..因為一定做的出來..效果也非常好! 05/19 23:29