作者waitingu (Phil-Ku)
看板Biotech
标题[求救] 请问Random primer的设计...
时间Wed May 18 10:58:20 2011
最近在clone一个大小约5000bp的gene，但设计了两三次不同的primer
或是用不同的Taq，始终只能Amplify出大概2000bp大小的band
跟同学讨论的结果，可能是因为我们的方法是cell line的mRNA转cDNA时，用oligo dT
RT的步骤做不完全长，所以她建议用random primer去做RT
想请问一下大家，这种primer是去买厂商制备好的(像是Promega是她推荐的)
或是可以自己请明欣或是基龙米克斯合成呢？(因为经费不太够)
而大家有经验用来cloning长片段的基因吗？效果如何？
感谢大家^^
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
1F：推 leoblack:hexamer跟commercial买就好啦~ 05/18 12:09
2F：推 gerpy:如果只是要Clone一个基亚，因去设计一个10bp以内的specific 05/18 19:29
3F：→ gerpy:primer 去做RT，效果会比random primer跟dT好，又更长！ 05/18 19:30
4F：→ gerpy:基亚，因=基因(打太快，请去掉"亚，") 05/18 19:31
5F：推 abcam:这种Random primer 和 siRNA 的序列 我们lab都是请QIAGEN 05/19 23:29
6F：→ abcam:原厂来设计的也..因为一定做的出来..效果也非常好! 05/19 23:29