作者wernshin (大白)
看板Biotech
標題[求救] DNA銀染染不出band
時間Wed May 18 08:26:40 2011
現在實驗在做DGGE,之前是用EtBr染色
後來發現有些band濃度太低染不出來改用銀染
做法為:
1.將膠片用RO水沖洗過一次,浸泡 0.1% AgNO3, 20min
2.以RO水沖洗兩遍,浸泡RO水, 1min
3.膠片取出加入呈色液 (0.01% NaBH4 + 1.5% NaOH + 0.4% 福馬林)
搖晃約30秒(膠片邊緣變淡褐色)
4.以RO水沖洗兩遍,浸泡0.75% Na2CO3, 1-3hr至band顯現
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現在遇到的問題是,都使用同樣條件及樣品,卻偶爾才染的出band...
染不出來時就是整張膠片變黃色,完全看不到band,有時膠片會變得有點白白的不透明
另外有時band會反白,在背景是黃色時band看起來是透明的,降低樣品濃度時就都不見了
有人知道問題出在哪裡嗎?
已經完全失去信心了...
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◆ From: 140.120.98.52
1F：→ shenhsu:之前也染不出來過..第二步沖一沖就好不要泡 AgNO3會不見.. 05/18 14:17
2F：→ shenhsu:另外...為什麼你沒有fix的步驟??? 是不需要嗎? 還是沒打XD 05/18 14:18
3F：→ wernshin:泡是因為看別人說這樣背景值比較淡,下次沖一沖就好 05/18 15:22
4F：→ wernshin:然後我看大部分人論文的DNA銀染都沒有固定的步驟耶... 05/18 15:22
5F：→ wernshin:今天試試看先用10%乙醇+0.5%醋酸固定五分鐘再染 05/18 15:23