作者wernshin (大白)
看板Biotech
标题[求救] DNA银染染不出band
时间Wed May 18 08:26:40 2011
现在实验在做DGGE,之前是用EtBr染色
後来发现有些band浓度太低染不出来改用银染
做法为:
1.将胶片用RO水冲洗过一次,浸泡 0.1% AgNO3, 20min
2.以RO水冲洗两遍,浸泡RO水, 1min
3.胶片取出加入呈色液 (0.01% NaBH4 + 1.5% NaOH + 0.4% 福马林)
摇晃约30秒(胶片边缘变淡褐色)
4.以RO水冲洗两遍,浸泡0.75% Na2CO3, 1-3hr至band显现
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现在遇到的问题是,都使用同样条件及样品,却偶尔才染的出band...
染不出来时就是整张胶片变黄色,完全看不到band,有时胶片会变得有点白白的不透明
另外有时band会反白,在背景是黄色时band看起来是透明的,降低样品浓度时就都不见了
有人知道问题出在哪里吗?
已经完全失去信心了...
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.98.52
1F：→ shenhsu:之前也染不出来过..第二步冲一冲就好不要泡 AgNO3会不见.. 05/18 14:17
2F：→ shenhsu:另外...为什麽你没有fix的步骤??? 是不需要吗? 还是没打XD 05/18 14:18
3F：→ wernshin:泡是因为看别人说这样背景值比较淡,下次冲一冲就好 05/18 15:22
4F：→ wernshin:然後我看大部分人论文的DNA银染都没有固定的步骤耶... 05/18 15:22
5F：→ wernshin:今天试试看先用10%乙醇+0.5%醋酸固定五分钟再染 05/18 15:23