作者keemun (冬天喝一杯熱熱的紅茶..)
看板Biotech
標題[求救] WST1測細胞IC50數值不穩定
時間Fri May 13 16:56:56 2011
最近用WST-1 (Biovision)測細胞加藥後的IC50
cell:懸浮性的HL60血癌細胞
protocol:
1. 在96well中加入80ul/well 細胞液
2. 加藥,藥物體積均以medium調整至20ul
3. 至特定時間點準備收細胞,直接加入10ul WST-1溶液/well
4. 0.5-4hr 每隔1 hr測OD440
Result:
1. 數值不合理,有時低濃度組的存活率比高濃度還低
2. 數值不穩定,三重複的跳動性很大 (不是pipette使用問題)
3. 數值不夠高？有時未加藥細胞WST-1反應4hr值才0.6左右
Question
1. WST1反應的合理OD值可到多少?
爬文看到OD約為0.2-2,我的值0.3-0.6可用嗎?需要調高細胞數嗎?
2. 96well是否體積太小? 若用24well或well要如何節省WST-1的用量?
這個藥不便宜說.....每個rxn約5元
但是...我們一次至少測6個濃度x3重複x2~3個時間點x無數組藥 Orz
有想過改用MTT,但是想到這麼多組別的離心......冏
請有使用經驗的人不吝指教,我會衷心感謝您的!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.67.244
1F：→ blence:有無cell-free control及OD650之類的校正background? 05/13 17:26
有的,每組數值先經過以下處理 OD440-OD650-cell free control
不過文章內提到的OD值為原始OD440
2F：→ blence:藥物若以DMSO之類的毒物稀釋,應該控制每個well的濃度相同 05/13 17:28
每個well控制在 DMSO 1%以下,加藥濃度過低的組我想DMSO已遠低於1%所以沒有控制
3F：→ blence:另外測toxicity前,應該先做一條cruve確認加藥起始點細胞數 05/13 17:29
做了,我挑選了與cell-free組相比有變色,但細胞數偏低的組,所以我才想說是不是要調高....
4F：→ blence:雖然你覺得不是pipette問題,但如何取10ul WST1,誤差會存在 05/13 17:34
我也覺得10ul很可怕說.....可是說明書就這樣加
好想知道其他用這個kit的人都加多少啊?
加多了成本就大幅上升說......老師不知道會不會再讓我買 冏
※ 編輯: keemun 來自: 140.128.67.244 (05/14 00:12)
5F：推 ChesterYeah:我覺得medium顏色都會影響數值 05/16 18:49