作者keemun (冬天喝一杯热热的红茶..)
看板Biotech
标题[求救] WST1测细胞IC50数值不稳定
时间Fri May 13 16:56:56 2011
最近用WST-1 (Biovision)测细胞加药後的IC50
cell:悬浮性的HL60血癌细胞
protocol:
1. 在96well中加入80ul/well 细胞液
2. 加药,药物体积均以medium调整至20ul
3. 至特定时间点准备收细胞,直接加入10ul WST-1溶液/well
4. 0.5-4hr 每隔1 hr测OD440
Result:
1. 数值不合理,有时低浓度组的存活率比高浓度还低
2. 数值不稳定,三重复的跳动性很大 (不是pipette使用问题)
3. 数值不够高？有时未加药细胞WST-1反应4hr值才0.6左右
Question
1. WST1反应的合理OD值可到多少?
爬文看到OD约为0.2-2,我的值0.3-0.6可用吗?需要调高细胞数吗?
2. 96well是否体积太小? 若用24well或well要如何节省WST-1的用量?
这个药不便宜说.....每个rxn约5元
但是...我们一次至少测6个浓度x3重复x2~3个时间点x无数组药 Orz
有想过改用MTT,但是想到这麽多组别的离心......冏
请有使用经验的人不吝指教,我会衷心感谢您的!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.67.244
1F：→ blence:有无cell-free control及OD650之类的校正background? 05/13 17:26
有的,每组数值先经过以下处理 OD440-OD650-cell free control
不过文章内提到的OD值为原始OD440
2F：→ blence:药物若以DMSO之类的毒物稀释,应该控制每个well的浓度相同 05/13 17:28
每个well控制在 DMSO 1%以下,加药浓度过低的组我想DMSO已远低於1%所以没有控制
3F：→ blence:另外测toxicity前,应该先做一条cruve确认加药起始点细胞数 05/13 17:29
做了,我挑选了与cell-free组相比有变色,但细胞数偏低的组,所以我才想说是不是要调高....
4F：→ blence:虽然你觉得不是pipette问题,但如何取10ul WST1,误差会存在 05/13 17:34
我也觉得10ul很可怕说.....可是说明书就这样加
好想知道其他用这个kit的人都加多少啊?
加多了成本就大幅上升说......老师不知道会不会再让我买 冏
※ 编辑: keemun 来自: 140.128.67.244 (05/14 00:12)
5F：推 ChesterYeah:我觉得medium颜色都会影响数值 05/16 18:49