作者waterbull (酷吉社爸..徵媽中)
看板Biotech
標題[方法] Ecoli 電穿孔的方法
時間Tue May 10 18:14:26 2011
各位前輩大家好
小的我最近開始用Bio-Rad Gene Pulser 做transformation
(菌種 E coli DH5alpha and BL21)
由於實驗室之前做的學長姐都離開了~他們是用來做yeast
老師又要我開始用它來做 E coli的transformtion
我看了Bio-Rad對於 E coli轉殖方法的手冊
上面說強度要開到2.5KV 30uF
但是~我上次這樣做的時候~發生電流無法穿過去~
Actual Voltage 是0.1 KV ~當場傻眼!!
而且電完之後~菌液變透明!!學長說~電壓開太強~但他也不知道該開多少
勝任細胞的做法也是依照手冊上保存在10%甘油冰在-80度冰箱
一直都做不出來~~老師每天都對我說加油~~
我也快受不了啦~~~!!
跪求各位前輩提供點意見~!!這樣比較有方向!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.77.224
1F：推 wensing:用CaCl2法！ 05/10 18:46
2F：→ waterbull:我也想用CaCl2~可是要做兩邊的比較!! 05/10 18:52
3F：→ gryou:CaCl2 便宜又好用！ 05/10 19:54
5F：→ twcitizen:學校有買CELL期刊的話，去參考這一篇 05/10 21:00
7F：→ shenhsu:請問用CaCl2然後heat shock的方式 能轉的plasmid大小上限? 05/10 21:45
8F：→ shenhsu:只聽說太大的heat shock不好轉 就要用電的才容易進去 05/10 21:46
9F：→ shenhsu:但一直不曉得怎麼樣算太大 多大以上該用電的呢? 05/10 21:46
10F：推 owl628:10kb以上就算大了吧 05/10 22:22
11F：→ bloodelf:CaCl2, if it ain't broken, why fix it? 05/10 23:06
12F：推 michealking:1.8KV 25uF 05/12 10:22
13F：推 michealking:heatshock越大效率越低 電的是效率比較高 05/12 10:25
14F：→ michealking:但是不代表最後結果好 05/12 10:25
15F：→ harry:CaCl2我試過26K大小沒問題 05/12 11:41
16F：推 wensing:不要管那麼多，重點是有菌種讓你能夠進行下一步實驗 05/12 14:12
17F：推 dodomilk:樓上，他說要做兩邊的比較，雖然我不曉得為什麼要比較 05/12 14:17
18F：推 sh88188:電流無法穿過去的意思是炸掉了嗎? 你在放菌進去的時候有出 05/13 20:43
19F：→ sh88188:現氣泡嗎? 還有你們是用間距多少的管子去電呢? 05/13 20:44