作者waterbull (酷吉社爸..徵妈中)
看板Biotech
标题[方法] Ecoli 电穿孔的方法
时间Tue May 10 18:14:26 2011
各位前辈大家好
小的我最近开始用Bio-Rad Gene Pulser 做transformation
(菌种 E coli DH5alpha and BL21)
由於实验室之前做的学长姐都离开了~他们是用来做yeast
老师又要我开始用它来做 E coli的transformtion
我看了Bio-Rad对於 E coli转殖方法的手册
上面说强度要开到2.5KV 30uF
但是~我上次这样做的时候~发生电流无法穿过去~
Actual Voltage 是0.1 KV ~当场傻眼!!
而且电完之後~菌液变透明!!学长说~电压开太强~但他也不知道该开多少
胜任细胞的做法也是依照手册上保存在10%甘油冰在-80度冰箱
一直都做不出来~~老师每天都对我说加油~~
我也快受不了啦~~~!!
跪求各位前辈提供点意见~!!这样比较有方向!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.77.224
1F：推 wensing:用CaCl2法！ 05/10 18:46
2F：→ waterbull:我也想用CaCl2~可是要做两边的比较!! 05/10 18:52
3F：→ gryou:CaCl2 便宜又好用！ 05/10 19:54
5F：→ twcitizen:学校有买CELL期刊的话，去参考这一篇 05/10 21:00
7F：→ shenhsu:请问用CaCl2然後heat shock的方式 能转的plasmid大小上限? 05/10 21:45
8F：→ shenhsu:只听说太大的heat shock不好转 就要用电的才容易进去 05/10 21:46
9F：→ shenhsu:但一直不晓得怎麽样算太大 多大以上该用电的呢? 05/10 21:46
10F：推 owl628:10kb以上就算大了吧 05/10 22:22
11F：→ bloodelf:CaCl2, if it ain't broken, why fix it? 05/10 23:06
12F：推 michealking:1.8KV 25uF 05/12 10:22
13F：推 michealking:heatshock越大效率越低 电的是效率比较高 05/12 10:25
14F：→ michealking:但是不代表最後结果好 05/12 10:25
15F：→ harry:CaCl2我试过26K大小没问题 05/12 11:41
16F：推 wensing:不要管那麽多，重点是有菌种让你能够进行下一步实验 05/12 14:12
17F：推 dodomilk:楼上，他说要做两边的比较，虽然我不晓得为什麽要比较 05/12 14:17
18F：推 sh88188:电流无法穿过去的意思是炸掉了吗? 你在放菌进去的时候有出 05/13 20:43
19F：→ sh88188:现气泡吗? 还有你们是用间距多少的管子去电呢? 05/13 20:44