作者ganbaol (StarRain)
看板Biotech
標題[討論] 關於 knockdown cell line
時間Wed May 4 00:18:27 2011
重複感染了兩次
使用中研院 RNAi core 那套系統
跑 western blot check 過沒問題
normal 和 scramble 都有訊號 (還蠻強的)
knockdown cell line (三株) 則完全偵測不到
但之後有一陣子(約一個月)沒做
所以先把細胞凍起來備用
現在把細胞解凍後已經有一段時間了
不管怎麼跑 western
knockdown cell(三株)和正常的訊號都一樣強...囧
是integrate進去的片段被踢掉嗎?
不知道有沒有人跟我一樣發生過這種問題......
是否只有重新感染才能解決?
請高人指點~
感激 >"<
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.42.200.106
1F：推 kaifish:是否有經過puromycin篩選? 05/04 00:34
2F：→ kaifish:如果你的基因與細胞分裂速度或死亡有關 05/04 00:34
3F：→ ganbaol:篩過了@ @ 05/04 00:36
4F：推 kaifish:可能knockdown後的細胞變成相對弱勢 05/04 00:37
5F：→ kaifish:重複感染或是挑clone的方法對您也許有幫助 05/04 00:37
6F：→ ganbaol:喔喔Q Q 謝謝樓上的建議~ 05/04 00:39
7F：推 lovenainai:我看來最有可能的是 vector 被 methylated 05/04 09:56
8F：→ lovenainai:你用的是那種 vector? 05/04 09:57
9F：推 icome:puromycin有持續加嗎... 如果是KD oncogene不加很快就沒了 05/04 10:14
10F：→ ganbaol:vector 是 CMV + MDG + RNAi 05/04 18:57
11F：→ ganbaol:因為要做毒性測試 所以沒辦法一直加puro耶 Q Q 05/04 18:58
12F：推 kakaman:會掉 趕快做完就好 05/10 22:24