作者ganbaol (StarRain)
看板Biotech
标题[讨论] 关於 knockdown cell line
时间Wed May 4 00:18:27 2011
重复感染了两次
使用中研院 RNAi core 那套系统
跑 western blot check 过没问题
normal 和 scramble 都有讯号 (还蛮强的)
knockdown cell line (三株) 则完全侦测不到
但之後有一阵子(约一个月)没做
所以先把细胞冻起来备用
现在把细胞解冻後已经有一段时间了
不管怎麽跑 western
knockdown cell(三株)和正常的讯号都一样强...囧
是integrate进去的片段被踢掉吗?
不知道有没有人跟我一样发生过这种问题......
是否只有重新感染才能解决?
请高人指点~
感激 >"<
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.42.200.106
1F：推 kaifish:是否有经过puromycin筛选? 05/04 00:34
2F：→ kaifish:如果你的基因与细胞分裂速度或死亡有关 05/04 00:34
3F：→ ganbaol:筛过了@ @ 05/04 00:36
4F：推 kaifish:可能knockdown後的细胞变成相对弱势 05/04 00:37
5F：→ kaifish:重复感染或是挑clone的方法对您也许有帮助 05/04 00:37
6F：→ ganbaol:喔喔Q Q 谢谢楼上的建议~ 05/04 00:39
7F：推 lovenainai:我看来最有可能的是 vector 被 methylated 05/04 09:56
8F：→ lovenainai:你用的是那种 vector? 05/04 09:57
9F：推 icome:puromycin有持续加吗... 如果是KD oncogene不加很快就没了 05/04 10:14
10F：→ ganbaol:vector 是 CMV + MDG + RNAi 05/04 18:57
11F：→ ganbaol:因为要做毒性测试 所以没办法一直加puro耶 Q Q 05/04 18:58
12F：推 kakaman:会掉 赶快做完就好 05/10 22:24