作者FINALFANCY ()
看板Biotech
標題[討論] SDS-PAGE幾個問題
時間Mon May 2 23:04:45 2011
1. protein處理完用sample buffer煮
這個步驟是要把雙硫鍵打斷?
還有煮沸時間我看過protocol長的有人說15分鍾 短的3分鐘
3分鐘的反應時間夠嗎
大家通常都用多少時間
2.如果想要把protein denature但不想把雙硫鍵打斷
是不是sample buffer不要加 b-me和DTT 就可以了?
那煮沸呢 我爬文有人說要煮 有人說不用
也就是說SDS不須要到100度 就可以使protein變性
那如果不煮的話 SDS須要多少反應溫度和時間
才可以使protein denature呢
問題有點多 謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.104.99.183
1F：推 leoblack:2-ME才斷雙硫鍵,只煮不加2-ME不會斷 05/02 23:12
2F：推 yaliu:我煮5分鐘～第二個問題不曉得，但如果跑native的，記得是不 05/02 23:12
3F：→ yaliu:加SDS（忘了，也只跑過一次） 05/02 23:12
4F：→ yaliu:然後SDS據我所知，不用加熱就可以denature了，所以破細胞 05/02 23:13
5F：→ yaliu:lysis buffer大都用它 05/02 23:14
6F：推 jamesonly:98度8MIN 05/02 23:55
7F：推 dodomilk:煮的時間真的是隨意，多煮幾分鐘也不會有什麼變化 05/02 23:58
8F：推 leoblack:推樓上~只要不要煮到乾掉or沈澱物產生(鍋巴)即可 05/03 00:58
9F：推 hangzer:其實不煮也沒差...SB裡面的SDS很夠了 05/03 09:43
10F：推 reinherd:我煮10min 05/03 23:25
11F：推 jethuang:SDS是detergent,只能打斷非共價鍵結,加2-MEorDTT 05/04 02:36
12F：→ jethuang:斷雙硫鍵,可以使有(雙硫鍵)四級結構protein,回到一級. 05/04 02:38
13F：推 jethuang:native gel不加SDS但還是會加2-ME吧!這樣所有的 05/04 02:42
14F：→ jethuang:protein sample,才能都處在一級結構跑電泳分離! 05/04 02:43