作者FINALFANCY ()
看板Biotech
标题[讨论] SDS-PAGE几个问题
时间Mon May 2 23:04:45 2011
1. protein处理完用sample buffer煮
这个步骤是要把双硫键打断?
还有煮沸时间我看过protocol长的有人说15分锺 短的3分钟
3分钟的反应时间够吗
大家通常都用多少时间
2.如果想要把protein denature但不想把双硫键打断
是不是sample buffer不要加 b-me和DTT 就可以了?
那煮沸呢 我爬文有人说要煮 有人说不用
也就是说SDS不须要到100度 就可以使protein变性
那如果不煮的话 SDS须要多少反应温度和时间
才可以使protein denature呢
问题有点多 谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.104.99.183
1F：推 leoblack:2-ME才断双硫键,只煮不加2-ME不会断 05/02 23:12
2F：推 yaliu:我煮5分钟～第二个问题不晓得，但如果跑native的，记得是不 05/02 23:12
3F：→ yaliu:加SDS（忘了，也只跑过一次） 05/02 23:12
4F：→ yaliu:然後SDS据我所知，不用加热就可以denature了，所以破细胞 05/02 23:13
5F：→ yaliu:lysis buffer大都用它 05/02 23:14
6F：推 jamesonly:98度8MIN 05/02 23:55
7F：推 dodomilk:煮的时间真的是随意，多煮几分钟也不会有什麽变化 05/02 23:58
8F：推 leoblack:推楼上~只要不要煮到乾掉or沈淀物产生(锅巴)即可 05/03 00:58
9F：推 hangzer:其实不煮也没差...SB里面的SDS很够了 05/03 09:43
10F：推 reinherd:我煮10min 05/03 23:25
11F：推 jethuang:SDS是detergent,只能打断非共价键结,加2-MEorDTT 05/04 02:36
12F：→ jethuang:断双硫键,可以使有(双硫键)四级结构protein,回到一级. 05/04 02:38
13F：推 jethuang:native gel不加SDS但还是会加2-ME吧!这样所有的 05/04 02:42
14F：→ jethuang:protein sample,才能都处在一级结构跑电泳分离! 05/04 02:43