※ 引述《resistor (resistor)》之銘言： : 請問有人用EGF刺激H1299或其他肺癌細胞嗎? : 實驗中要用EGF刺激下游的AKT.ERK表現 : 想要間接證明細胞膜上的EGFR受藥物影響 : 但control組本身AKT.ERK的表現量很高 : 導致加入EGF後看不出差異 : 參考文獻後發現 : 每篇control的EGFR.AKT.ERK的表現量差異很大 : 有的幾乎沒表現 : 有的刺激前後沒太大差異 表現量都蠻高的 你用 H1299 的原因是什麼?? 你有看過他 EGFR 的表現量嗎? 他帶的是 wt EGFR 我幾乎可以確定這個 cell line 的 survival 根本不 depend on EGFR signaling 你有試過加 egfr inhibitor 之後看 Akt 嗎? 他的 Akt signaling 很有可能不是主要靠 EGFR 去 activate : paper對加EGF的部份並沒有很詳細的描述 : 所以想請教大家 : 加入EGF前需要把medium換成serum free 還是直接加入就好 : 細胞數對EGF刺激的結果是否有影響 : 因為要處理藥物加上要收western用的sample : 所以種的細胞數很多 3x10^6/10 cm dish : 就EGFR.pEGFR的部份 : 抽膜蛋白結果是否會更準確? paper上似乎都沒有提到這點 妳要收細胞的時候 吸乾medium -> pbs wash 吸乾淨一點 -> 直接加 4M urea buffer -> sonication 所有東西都會溶在 urea 裡面 : 請有經驗的高手提供我一些意見了 : 謝謝 --

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