※ 引述《resistor (resistor)》之铭言： : 请问有人用EGF刺激H1299或其他肺癌细胞吗? : 实验中要用EGF刺激下游的AKT.ERK表现 : 想要间接证明细胞膜上的EGFR受药物影响 : 但control组本身AKT.ERK的表现量很高 : 导致加入EGF後看不出差异 : 参考文献後发现 : 每篇control的EGFR.AKT.ERK的表现量差异很大 : 有的几乎没表现 : 有的刺激前後没太大差异 表现量都蛮高的 你用 H1299 的原因是什麽?? 你有看过他 EGFR 的表现量吗? 他带的是 wt EGFR 我几乎可以确定这个 cell line 的 survival 根本不 depend on EGFR signaling 你有试过加 egfr inhibitor 之後看 Akt 吗? 他的 Akt signaling 很有可能不是主要靠 EGFR 去 activate : paper对加EGF的部份并没有很详细的描述 : 所以想请教大家 : 加入EGF前需要把medium换成serum free 还是直接加入就好 : 细胞数对EGF刺激的结果是否有影响 : 因为要处理药物加上要收western用的sample : 所以种的细胞数很多 3x10^6/10 cm dish : 就EGFR.pEGFR的部份 : 抽膜蛋白结果是否会更准确? paper上似乎都没有提到这点 你要收细胞的时候 吸乾medium -> pbs wash 吸乾净一点 -> 直接加 4M urea buffer -> sonication 所有东西都会溶在 urea 里面 : 请有经验的高手提供我一些意见了 : 谢谢 --

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