※ 引述《premire (熱騰騰的泡麵)》之銘言： : 小弟目前使用Hitrap desalting column進行gel filtration : 這類columng是利用size exclution方式分離純化 : 我的inj sample是兩個分子量差距極大的protein 目的是要把大分子純化 : 但是一方面也想看看小分子多久會沖提出來 : 最近可以看到大分子很快就出來了 : 假設sample沒有和media binding 打入與column volumn同體積的buffer之內就會沖出來 : 但是結果小分子遲遲都沒有看到 : 可能的原因有： : (1)小分子protein跑到column的media(dextran)並且binding : (2)我的buffer條件（目前先使用含0.5 mM DTPA PBS） : 有使用經驗的版上大大能否分享經驗呢 : 不勝感激！！！ 你要把大分子和小分子的glutathione分離這樣做是對的 HiTrap 用的sephadex G-25 superfine非常常用 在常用條件下應該是不會和你的東西binding 問題可能是出在你的detection方法 如果我沒猜錯你可能是想看280nm吸收 但是glutathione雖然是一個3a.a.(中間鍵結其實不太一樣...)的peptide 但它沒有Trp Tyr Phe 這些苯環結構 所以沒有280nm吸收 如果你是做FPLC 你只能從sample buffer和desalting buffer之間的差異 看導電度或pH變化 也就是你可以配一個鹽濃度 pH值不太一樣的buffer當desalting buffer 當小分子在一個CV沖出來時 你應該會看到導電度或pH變化 前提是你不能overloading 一般來說 大約一次最多只能inject 1個CV的30%這麼多 放心 glutathione會跟原始buffer含的那些鹽類一起流出來的 (當然glutathione也是有自己的檢測assay就是了...我是沒在看啦...) 如果你是手動 那就只好自己收fraction啦 XD --

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