※ 引述《premire (热腾腾的泡面)》之铭言： : 小弟目前使用Hitrap desalting column进行gel filtration : 这类columng是利用size exclution方式分离纯化 : 我的inj sample是两个分子量差距极大的protein 目的是要把大分子纯化 : 但是一方面也想看看小分子多久会冲提出来 : 最近可以看到大分子很快就出来了 : 假设sample没有和media binding 打入与column volumn同体积的buffer之内就会冲出来 : 但是结果小分子迟迟都没有看到 : 可能的原因有： : (1)小分子protein跑到column的media(dextran)并且binding : (2)我的buffer条件（目前先使用含0.5 mM DTPA PBS） : 有使用经验的版上大大能否分享经验呢 : 不胜感激！！！ 你要把大分子和小分子的glutathione分离这样做是对的 HiTrap 用的sephadex G-25 superfine非常常用 在常用条件下应该是不会和你的东西binding 问题可能是出在你的detection方法 如果我没猜错你可能是想看280nm吸收 但是glutathione虽然是一个3a.a.(中间键结其实不太一样...)的peptide 但它没有Trp Tyr Phe 这些苯环结构 所以没有280nm吸收 如果你是做FPLC 你只能从sample buffer和desalting buffer之间的差异 看导电度或pH变化 也就是你可以配一个盐浓度 pH值不太一样的buffer当desalting buffer 当小分子在一个CV冲出来时 你应该会看到导电度或pH变化 前提是你不能overloading 一般来说 大约一次最多只能inject 1个CV的30%这麽多 放心 glutathione会跟原始buffer含的那些盐类一起流出来的 (当然glutathione也是有自己的检测assay就是了...我是没在看啦...) 如果你是手动 那就只好自己收fraction啦 XD --

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