作者DanteDevil (丹特)
看板Biotech
標題[求救] IHC 問題急救!
時間Wed Apr 27 21:49:55 2011
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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各位前輩好,最近開始試做IHC
有很多事情不知道是不是應該要注意...
我們實驗室用的retrieval方法為sodium citrate buffer (10mM PH=9)
然後隔水加熱(聽說有人是用微波盧)到95度以上30min
然後就讓他放冷做接下來的步驟...這個protocol都做得出來我們要看的東西
只是因為今天實驗有點多
所以在放冷的部分我放了約4個小時...
所以這次染出來的很不明顯(前一次染都很明顯)
因為我想retrieval主要是使PFA造成的masking現象消失(打斷binding)
使結合位露出來讓我們的抗體可以上上去
所以我只是在想,4個小時真的可以讓我們剛打斷的建結又結回去??
還是各位認為不是放冷時間的關係?
希望前輩可以給在下一點寶貴的建議(鞠躬)
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期末強片:
1.驚奇四修人 2.死當筆記本 3.不能過的祕密 4.重修狀 5.當二一來敲門
6.驚天動地59分 7.把學分找回來 8.沒過黑幫 9.有學分真好 10.現在,很想當你
11.賜零 12.穿越年假擋修你 13.全面重修
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 115.43.211.7
1F：推 nexusfantasy:我之前是用微波爐 3min>>2min 隔水流水冷卻20min 04/28 01:58
2F：→ nexusfantasy:這四個小時內 你有放到乾掉嗎？ 04/28 01:58
3F：推 nexusfantasy:而且用的citrate buffer pH=6 04/28 02:01
4F：推 tchan:citrate buffer應該要調成pH=6吧!! 04/28 07:52
5F：推 cbeta:citrate buffer有分6.0跟9.0兩種，看你要做的實驗去調整 04/28 09:13
6F：→ goshr:我還以為pH9的是tris EDTA 05/13 10:04