作者DanteDevil (丹特)
看板Biotech
标题[求救] IHC 问题急救!
时间Wed Apr 27 21:49:55 2011
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
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各位前辈好,最近开始试做IHC
有很多事情不知道是不是应该要注意...
我们实验室用的retrieval方法为sodium citrate buffer (10mM PH=9)
然後隔水加热(听说有人是用微波卢)到95度以上30min
然後就让他放冷做接下来的步骤...这个protocol都做得出来我们要看的东西
只是因为今天实验有点多
所以在放冷的部分我放了约4个小时...
所以这次染出来的很不明显(前一次染都很明显)
因为我想retrieval主要是使PFA造成的masking现象消失(打断binding)
使结合位露出来让我们的抗体可以上上去
所以我只是在想,4个小时真的可以让我们刚打断的建结又结回去??
还是各位认为不是放冷时间的关系?
希望前辈可以给在下一点宝贵的建议(鞠躬)
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期末强片:
1.惊奇四修人 2.死当笔记本 3.不能过的秘密 4.重修状 5.当二一来敲门
6.惊天动地59分 7.把学分找回来 8.没过黑帮 9.有学分真好 10.现在,很想当你
11.赐零 12.穿越年假挡修你 13.全面重修
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 115.43.211.7
1F：推 nexusfantasy:我之前是用微波炉 3min>>2min 隔水流水冷却20min 04/28 01:58
2F：→ nexusfantasy:这四个小时内 你有放到乾掉吗？ 04/28 01:58
3F：推 nexusfantasy:而且用的citrate buffer pH=6 04/28 02:01
4F：推 tchan:citrate buffer应该要调成pH=6吧!! 04/28 07:52
5F：推 cbeta:citrate buffer有分6.0跟9.0两种，看你要做的实验去调整 04/28 09:13
6F：→ goshr:我还以为pH9的是tris EDTA 05/13 10:04