作者vm212 (找愛 小護士)
看板Biotech
標題Re: [求救] RNA PCR
時間Mon Apr 25 19:15:44 2011
※ 引述《vm212 (找愛 小護士)》之銘言：
: 各位前輩們
: 因為最近剛開始做有關RNA的實驗，
: 我抽完RNA轉Cdna後接著做PCR
: 但一直沒有PCR產物產生
: 我想請問
: 是否為我的PRIMER有問題
: 當初設計PCR PRIMER的時候
: 是利用ncbi中目標基因的 mRAN進行設計
: 還是需要利用目標基因的dna進行設計///
: 謝謝大家的幫忙了!!!
各位前輩很抱歉我沒交代清楚~~
我的實驗目的是利用overlap PCR做gene mutation
利用kit抽取rna後，作RT-PCR。
因為卡住好久了 又沒人可以問
所以來這邊叨擾大家...
謝謝大家!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.160.150.114
1F：推 leoblack:每個步驟都做個control來check才能知道問題在哪啊~ 04/25 22:10
2F：→ leoblack:抽的RNA quality如何?!RT-PCR後,拿個actin一起PCR~ 04/25 22:11
3F：推 leoblack:不然你沒作check~光這樣問要怎樣知道哪出問題了!?擲茭嘛? 04/25 22:13
4F：推 Realthugz:甚至reagent,kit的control能做就做 不要鐵齒 04/26 01:27
5F：→ Realthugz:cell type是不是有表現你要的gene 很多都要先弄清楚 04/26 01:28
6F：→ Realthugz:我有碰過一個gene在某cell表現量很低甚至說沒有 04/26 01:30
7F：→ gryou:如果有full-length的plasmid拿來p或許會輕鬆許多！ 04/27 00:15
8F：→ gryou:至少不會有p到其他東西的可能 我也卡很久 還有三個突變等著 04/27 00:15
9F：→ vm212:我pcr終於p出來了，謝謝大家的幫忙! 04/29 21:03
10F：→ chvkimo:所以原PO是哪裡出問題? 抱歉我沒追蹤文章 05/04 11:23