作者vm212 (找爱 小护士)
看板Biotech
标题Re: [求救] RNA PCR
时间Mon Apr 25 19:15:44 2011
※ 引述《vm212 (找爱 小护士)》之铭言：
: 各位前辈们
: 因为最近刚开始做有关RNA的实验，
: 我抽完RNA转Cdna後接着做PCR
: 但一直没有PCR产物产生
: 我想请问
: 是否为我的PRIMER有问题
: 当初设计PCR PRIMER的时候
: 是利用ncbi中目标基因的 mRAN进行设计
: 还是需要利用目标基因的dna进行设计///
: 谢谢大家的帮忙了!!!
各位前辈很抱歉我没交代清楚~~
我的实验目的是利用overlap PCR做gene mutation
利用kit抽取rna後，作RT-PCR。
因为卡住好久了 又没人可以问
所以来这边叨扰大家...
谢谢大家!!
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.160.150.114
1F：推 leoblack:每个步骤都做个control来check才能知道问题在哪啊~ 04/25 22:10
2F：→ leoblack:抽的RNA quality如何?!RT-PCR後,拿个actin一起PCR~ 04/25 22:11
3F：推 leoblack:不然你没作check~光这样问要怎样知道哪出问题了!?掷茭嘛? 04/25 22:13
4F：推 Realthugz:甚至reagent,kit的control能做就做 不要铁齿 04/26 01:27
5F：→ Realthugz:cell type是不是有表现你要的gene 很多都要先弄清楚 04/26 01:28
6F：→ Realthugz:我有碰过一个gene在某cell表现量很低甚至说没有 04/26 01:30
7F：→ gryou:如果有full-length的plasmid拿来p或许会轻松许多！ 04/27 00:15
8F：→ gryou:至少不会有p到其他东西的可能 我也卡很久 还有三个突变等着 04/27 00:15
9F：→ vm212:我pcr终於p出来了，谢谢大家的帮忙! 04/29 21:03
10F：→ chvkimo:所以原PO是哪里出问题? 抱歉我没追踪文章 05/04 11:23