作者FENOR (FENOR)
看板Biotech
標題Re: [討論] 磷酸化與非磷酸化蛋白
時間Sun Apr 24 14:56:38 2011
※ 引述《spears135 (ana)》之銘言：
小小的意見，不一定正確。
: 我想請問的是:
: TOTAL protein如果表現增加
: 那即表示磷酸形化式也可能是增加的
不一定。
: 當然~有壓磷酸化的形式必更顯完整
: 學長跟我說如果total增加磷酸化就不一定要壓
: 但我學姐則說最好要壓
實際上是要壓，因為total上升不等於modification一定會上升。
不過最後還是要看你的實驗目的。
: 最近狂壓磷酸根的蛋白
: 但成功率真的好低= =(不是沒東西就是糊糊)
你確定抗體沒問題嗎?實際上很多phosphorylation的抗體都有壓到其他東西的疑慮。
如果真的有擔心的話，你就加抑制phosphatase的東西下去。。
: 所以到底是可以不用壓磷酸形式嗎?
: 還是壓磷酸化的蛋白有沒有什麼好建議??
: 學姐說壓磷酸根的要趁新鮮
: 所以我沒個禮拜都在收細胞
: 馬上收馬上壓而且還不一定壓得出來~(淚奔)
慢慢來就好。
: 希望高手給點建議
: thx^^
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◆ From: 140.112.125.84
1F：推 spears135:感謝回答^^ 04/24 16:44
2F：→ spears135:不過我想請教一下:你所謂的實驗目的是指怎樣的情況? 04/24 16:45
3F：→ spears135:另外~我的抗體都是新配的,雖然壓磷酸化得很容易有雜BAND 04/24 16:48
4F：→ spears135:但其實並非所有的磷酸化都壓不出來 04/24 16:49
5F：→ spears135:指是某些是怎麼壓都壓不出來..... 04/24 16:49
如果只是要看total protein level會不會起來那就不用壓phosphorylation
modification。如果不是的話就要壓。
至於我說的壓到其他東西的疑慮是因為phosphorylation一壓下去會有很多類似的
sequence會一起被認到，要解決這個問題就是做個mutant。
※ 編輯: FENOR 來自: 140.112.125.84 (04/24 18:29)
6F：→ celestial318:之前壓phospho都要用BSA blocking... 04/25 00:26
7F：推 icome:你有加sodium vanadate嗎? 04/25 08:38
8F：推 spears135:我沒加這個...請問樓上這是什麼? 04/26 09:50
9F：推 icome:phosphatase inhibitor 加了phospho訊號會比較強 04/26 15:37