作者FENOR (FENOR)
看板Biotech
标题Re: [讨论] 磷酸化与非磷酸化蛋白
时间Sun Apr 24 14:56:38 2011
※ 引述《spears135 (ana)》之铭言：
小小的意见，不一定正确。
: 我想请问的是:
: TOTAL protein如果表现增加
: 那即表示磷酸形化式也可能是增加的
不一定。
: 当然~有压磷酸化的形式必更显完整
: 学长跟我说如果total增加磷酸化就不一定要压
: 但我学姐则说最好要压
实际上是要压，因为total上升不等於modification一定会上升。
不过最後还是要看你的实验目的。
: 最近狂压磷酸根的蛋白
: 但成功率真的好低= =(不是没东西就是糊糊)
你确定抗体没问题吗?实际上很多phosphorylation的抗体都有压到其他东西的疑虑。
如果真的有担心的话，你就加抑制phosphatase的东西下去。。
: 所以到底是可以不用压磷酸形式吗?
: 还是压磷酸化的蛋白有没有什麽好建议??
: 学姐说压磷酸根的要趁新鲜
: 所以我没个礼拜都在收细胞
: 马上收马上压而且还不一定压得出来~(泪奔)
慢慢来就好。
: 希望高手给点建议
: thx^^
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.84
1F：推 spears135:感谢回答^^ 04/24 16:44
2F：→ spears135:不过我想请教一下:你所谓的实验目的是指怎样的情况? 04/24 16:45
3F：→ spears135:另外~我的抗体都是新配的,虽然压磷酸化得很容易有杂BAND 04/24 16:48
4F：→ spears135:但其实并非所有的磷酸化都压不出来 04/24 16:49
5F：→ spears135:指是某些是怎麽压都压不出来..... 04/24 16:49
如果只是要看total protein level会不会起来那就不用压phosphorylation
modification。如果不是的话就要压。
至於我说的压到其他东西的疑虑是因为phosphorylation一压下去会有很多类似的
sequence会一起被认到，要解决这个问题就是做个mutant。
※ 编辑: FENOR 来自: 140.112.125.84 (04/24 18:29)
6F：→ celestial318:之前压phospho都要用BSA blocking... 04/25 00:26
7F：推 icome:你有加sodium vanadate吗? 04/25 08:38
8F：推 spears135:我没加这个...请问楼上这是什麽? 04/26 09:50
9F：推 icome:phosphatase inhibitor 加了phospho讯号会比较强 04/26 15:37