作者vm212 (找愛 小護士)
看板Biotech
標題[求救] RNA PCR
時間Sun Apr 24 10:54:03 2011
各位前輩們
因為最近剛開始做有關RNA的實驗，
我抽完RNA轉Cdna後接著做PCR
但一直沒有PCR產物產生
我想請問
是否為我的PRIMER有問題
當初設計PCR PRIMER的時候
是利用ncbi中目標基因的 mRAN進行設計
還是需要利用目標基因的dna進行設計///
謝謝大家的幫忙了!!!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.160.148.64
1F：推 leoblack:你有p個GAPDH或是actin當internal control嘛? 04/24 11:02
2F：→ vm212:沒有ㄟ~~因為學姊說不用 因為我們不是要做rt-pcr 04/24 11:11
3F：→ vm212:我想問樓上的前輩 我用rna作設計primer的基因序列 這樣對嗎 04/24 11:13
4F：推 dodomilk:所以你是從一堆cDNA裡面P出其中一種你想到的DNA嗎？ 04/24 12:42
5F：推 kaifish:有無確認cDNA轉成功? 04/24 15:22
6F：→ vm212:是阿!我就是要在一堆cDNA中，利用PCR增幅出我要的片段!! 04/24 19:40
7F：→ vm212:請問前備我要如何知道cDNA是否有轉成功?跑DNA膠嗎?? 04/24 19:42
8F：→ mesenchymal:我覺得p個GAPDH看看有沒有product就可以知道了 04/24 20:38
9F：→ aceliang:叫管家出來面對不就知道了 :) 04/24 21:59
10F：推 leoblack:原po,RNA轉cDNA就是RT-PCR,你怎麼會說你不是作RT-PCR?! 04/24 23:39
11F：→ blence:應該是要cloning,所以才不需看GAPDH internal control,但是 04/25 00:05
12F：→ blence:還是要找些control確認你的cDNA quality 04/25 00:06
13F：推 aceliang:我想原po可能是把rt想成realtime了。 04/25 00:15
14F：→ Realthugz:你有找CDS嗎 感覺primer有問題 04/25 05:06
15F：推 Realthugz:耍笨了 依據的序列是mRNA 應該是沒差 04/25 05:23
16F：推 leoblack:樓上~如果是要cloning,你說找CDS沒錯,因為mRNA有5'/3'UTR 04/25 07:24
17F：→ chvkimo:這個實驗有兩個變數,1>primer是否可用? 2>cDNA quality 04/25 13:56
18F：→ chvkimo:需要個別用不同的實驗先測試過 才能回答你想問的問題 04/25 13:58
19F：→ chvkimo:我也覺得原po應該是要cloning 04/25 13:59
20F：→ nexusfantasy:說實話..看你用字的大小寫與推文..基礎知識有待加強 04/26 04:25
21F：→ nexusfantasy:看懂所有的原理..列出所有的protocol與操作細節.. 04/26 04:28
22F：→ nexusfantasy:這邊的板友才有辦法幫你做troubleshooting... 04/26 04:31
23F：→ vm212:謝謝各位的幫忙，問題已經解決了! 04/29 21:03