作者vm212 (找爱 小护士)
看板Biotech
标题[求救] RNA PCR
时间Sun Apr 24 10:54:03 2011
各位前辈们
因为最近刚开始做有关RNA的实验，
我抽完RNA转Cdna後接着做PCR
但一直没有PCR产物产生
我想请问
是否为我的PRIMER有问题
当初设计PCR PRIMER的时候
是利用ncbi中目标基因的 mRAN进行设计
还是需要利用目标基因的dna进行设计///
谢谢大家的帮忙了!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.160.148.64
1F：推 leoblack:你有p个GAPDH或是actin当internal control嘛? 04/24 11:02
2F：→ vm212:没有ㄟ~~因为学姊说不用 因为我们不是要做rt-pcr 04/24 11:11
3F：→ vm212:我想问楼上的前辈 我用rna作设计primer的基因序列 这样对吗 04/24 11:13
4F：推 dodomilk:所以你是从一堆cDNA里面P出其中一种你想到的DNA吗？ 04/24 12:42
5F：推 kaifish:有无确认cDNA转成功? 04/24 15:22
6F：→ vm212:是阿!我就是要在一堆cDNA中，利用PCR增幅出我要的片段!! 04/24 19:40
7F：→ vm212:请问前备我要如何知道cDNA是否有转成功?跑DNA胶吗?? 04/24 19:42
8F：→ mesenchymal:我觉得p个GAPDH看看有没有product就可以知道了 04/24 20:38
9F：→ aceliang:叫管家出来面对不就知道了 :) 04/24 21:59
10F：推 leoblack:原po,RNA转cDNA就是RT-PCR,你怎麽会说你不是作RT-PCR?! 04/24 23:39
11F：→ blence:应该是要cloning,所以才不需看GAPDH internal control,但是 04/25 00:05
12F：→ blence:还是要找些control确认你的cDNA quality 04/25 00:06
13F：推 aceliang:我想原po可能是把rt想成realtime了。 04/25 00:15
14F：→ Realthugz:你有找CDS吗 感觉primer有问题 04/25 05:06
15F：推 Realthugz:耍笨了 依据的序列是mRNA 应该是没差 04/25 05:23
16F：推 leoblack:楼上~如果是要cloning,你说找CDS没错,因为mRNA有5'/3'UTR 04/25 07:24
17F：→ chvkimo:这个实验有两个变数,1>primer是否可用? 2>cDNA quality 04/25 13:56
18F：→ chvkimo:需要个别用不同的实验先测试过 才能回答你想问的问题 04/25 13:58
19F：→ chvkimo:我也觉得原po应该是要cloning 04/25 13:59
20F：→ nexusfantasy:说实话..看你用字的大小写与推文..基础知识有待加强 04/26 04:25
21F：→ nexusfantasy:看懂所有的原理..列出所有的protocol与操作细节.. 04/26 04:28
22F：→ nexusfantasy:这边的板友才有办法帮你做troubleshooting... 04/26 04:31
23F：→ vm212:谢谢各位的帮忙，问题已经解决了! 04/29 21:03