作者yawai (小狐)
看板Biotech
標題[求救] 限制酵素的buffer
時間Thu Apr 21 12:22:53 2011
又來詢問板上的高手了 >"<
我目前是要用 Hind III 和 Xba I 去切PCR產物
(在primer上有設計切位)
因為只會切掉一點點 所以無法用跑膠的方式確認
質體也是做同樣的處理(被切掉的大小約500bp)
問題來了因為用的酵素是Takara的
雖然兩種酵素都是用 M buffer 可是 Xbal I 卻要加 BSA
我之前是用減半的BSA去反應 但是質體和我要的片段做ligation之後
再transform 之後大量表現 卻完全沒有長
究竟我該加入全量的BSA 還是不要加 或者只能分開切了呢??
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.127.37.134
1F：→ yaliu:加BSA一起切沒關係～另外老問題primer有空幾個mer嗎 04/21 12:36
2F：→ conective:加正常量BSA即可 04/21 13:37
3F：→ conective:直接PCR產物切去接一直作不出來的話 建議先做個TA 04/21 13:38
4F：→ conective:再用酵素切出去跟VECTOR接 04/21 13:38
5F：→ yawai:空幾個mer 是什麼意思呢 @@a 04/21 14:11
6F：推 conective:就是說你在PRIMER切位前端還要加上幾個無意義的MER 04/21 16:34
7F：推 HEK293:加幾個gcgc就行了。e.g.: gCgCgAATTC-so on 04/21 16:37
8F：→ conective:讓酵素有地方站 EX: xxxx-Xbal I-xxxxxx 04/21 16:37
9F：→ yawai:感謝大家!! 我會再試試 04/21 17:10