作者yawai (小狐)
看板Biotech
标题[求救] 限制酵素的buffer
时间Thu Apr 21 12:22:53 2011
又来询问板上的高手了 >"<
我目前是要用 Hind III 和 Xba I 去切PCR产物
(在primer上有设计切位)
因为只会切掉一点点 所以无法用跑胶的方式确认
质体也是做同样的处理(被切掉的大小约500bp)
问题来了因为用的酵素是Takara的
虽然两种酵素都是用 M buffer 可是 Xbal I 却要加 BSA
我之前是用减半的BSA去反应 但是质体和我要的片段做ligation之後
再transform 之後大量表现 却完全没有长
究竟我该加入全量的BSA 还是不要加 或者只能分开切了呢??
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.127.37.134
1F：→ yaliu:加BSA一起切没关系～另外老问题primer有空几个mer吗 04/21 12:36
2F：→ conective:加正常量BSA即可 04/21 13:37
3F：→ conective:直接PCR产物切去接一直作不出来的话 建议先做个TA 04/21 13:38
4F：→ conective:再用酵素切出去跟VECTOR接 04/21 13:38
5F：→ yawai:空几个mer 是什麽意思呢 @@a 04/21 14:11
6F：推 conective:就是说你在PRIMER切位前端还要加上几个无意义的MER 04/21 16:34
7F：推 HEK293:加几个gcgc就行了。e.g.: gCgCgAATTC-so on 04/21 16:37
8F：→ conective:让酵素有地方站 EX: xxxx-Xbal I-xxxxxx 04/21 16:37
9F：→ yawai:感谢大家!! 我会再试试 04/21 17:10