作者jeffshow (su ki ....)
看板Biotech
標題[求救] DNA digist後消失?
時間Thu Apr 21 11:59:28 2011
想請問各位大大
是否有人在DNA用酵素切完之後
拿去測OD 值都不錯(~0.1 microgram/microliter)
260/280都有1.8以上
可是跑膠卻都沒看到東西
請問可能是什麼情況呢?
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.123.85.131
1F：推 FENOR:1.你OD測的有問題，其實你那個濃度也不算太濃，是背景值的 04/21 12:22
2F：→ FENOR:可能性不小。 04/21 12:22
3F：→ FENOR:2.用的酵素會不會切到你的DNA product 04/21 12:23
4F：推 rickkao11:會不會忘記放EtBR 04/21 12:31
5F：推 yaliu:看你加多少DNA量作用。再來就是loading 的DNA量~ 04/21 12:34
6F：推 HEK293:有人「切完之後」在測OD的嘛？不準阿= = 04/21 13:22
7F：→ conective:切之前有測過嗎？ 04/21 13:36
8F：→ jeffshow:切之前有測過有~差不多也0.1-0.2 04/21 13:46
9F：→ jeffshow:切之前也有跑膠~蠻亮的! 04/21 13:46
10F：→ jeffshow:load gel=2 microliter 04/21 13:47
11F：推 conective:DNA來源是什麼?plasmid? 04/21 13:52
12F：→ jeffshow:細胞total DNA 04/21 13:54
13F：→ aeroufo:細胞total genomic DNA這樣會不會太低了點壓?? 04/21 14:15
14F：推 yaliu:下多少量的DNA去切?作用體積？切完後是loading 2 ul? 04/21 19:36
15F：→ yaliu:切genomic的話，量要下的多，跑膠才會看到smear，不然會很淡 04/21 19:38
16F：→ jeffshow:總共用10 microgram去切 總體積70 microliter 04/21 19:49
17F：→ Ianthegood:放成dnase了= =? 04/21 20:49
18F：→ mzac1b:會不會用錯buffer 產生 "star activity"? 04/21 20:55
19F：→ jeffshow:buffer應該沒錯~照原廠的protocol 除了一個ZnSO4換Zncl2 04/21 21:36
20F：→ jeffshow:因為實驗室只有這種~不過應該沒差別這麼大吧? 04/21 21:37
21F：推 yaliu:那我覺得你應該是loading gel量太少所以看不見～ 04/21 23:11
22F：→ yaliu:因為是genome，所以會是smear~當然量多才會看的比較清楚 04/21 23:12
23F：→ jeffshow:load 10 microliter一樣也沒看到@@ 04/22 13:35
24F：→ boxiaokai:你要做什麼實驗? genomic southern? 04/22 13:56
25F：→ boxiaokai:先把實驗目的描述清楚會不會比較好抓原因 04/22 14:03
26F：→ boxiaokai:假設你要做genomic southern 就我的經驗是要下10ug DNA 04/22 14:04
27F：→ boxiaokai:final volumn 20ul 這樣看來你的genomic DNA濃度太低了 04/22 14:06
28F：→ supray:1ug 跑 genomic DNA 會分散成n個片段 一定看不到的啊-.- 04/22 18:56
29F：→ supray:你下的量 是跑plasmid的量 04/22 18:56
30F：→ jeffshow:那要下多少才看的到呢? 04/24 23:47
31F：推 yaliu:你要不要附上電泳圖？切之前genomic DNA電泳(量要註明一下) 04/25 01:41
32F：→ yaliu:切之後的電泳圖，操作及添加量標示清楚 04/25 01:42
33F：→ yaliu:其實真的很有可能是注入量太低所以看不見啦～或許你final作 04/25 01:45
34F：→ yaliu:用體積減少，或者增加作用的DNA量，盡可能loading多一點 04/25 01:46
35F：→ Realthugz:切之前去跑膠看看 我有遇過很難搞的plasmid 04/25 04:57
36F：→ Realthugz:OD數值跟curve都挺正常 卻跟電泳對不起來 PS:我不是新手 04/25 04:58