作者jeffshow (su ki ....)
看板Biotech
标题[求救] DNA digist後消失?
时间Thu Apr 21 11:59:28 2011
想请问各位大大
是否有人在DNA用酵素切完之後
拿去测OD 值都不错(~0.1 microgram/microliter)
260/280都有1.8以上
可是跑胶却都没看到东西
请问可能是什麽情况呢?
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.123.85.131
1F：推 FENOR:1.你OD测的有问题，其实你那个浓度也不算太浓，是背景值的 04/21 12:22
2F：→ FENOR:可能性不小。 04/21 12:22
3F：→ FENOR:2.用的酵素会不会切到你的DNA product 04/21 12:23
4F：推 rickkao11:会不会忘记放EtBR 04/21 12:31
5F：推 yaliu:看你加多少DNA量作用。再来就是loading 的DNA量~ 04/21 12:34
6F：推 HEK293:有人「切完之後」在测OD的嘛？不准阿= = 04/21 13:22
7F：→ conective:切之前有测过吗？ 04/21 13:36
8F：→ jeffshow:切之前有测过有~差不多也0.1-0.2 04/21 13:46
9F：→ jeffshow:切之前也有跑胶~蛮亮的! 04/21 13:46
10F：→ jeffshow:load gel=2 microliter 04/21 13:47
11F：推 conective:DNA来源是什麽?plasmid? 04/21 13:52
12F：→ jeffshow:细胞total DNA 04/21 13:54
13F：→ aeroufo:细胞total genomic DNA这样会不会太低了点压?? 04/21 14:15
14F：推 yaliu:下多少量的DNA去切?作用体积？切完後是loading 2 ul? 04/21 19:36
15F：→ yaliu:切genomic的话，量要下的多，跑胶才会看到smear，不然会很淡 04/21 19:38
16F：→ jeffshow:总共用10 microgram去切 总体积70 microliter 04/21 19:49
17F：→ Ianthegood:放成dnase了= =? 04/21 20:49
18F：→ mzac1b:会不会用错buffer 产生 "star activity"? 04/21 20:55
19F：→ jeffshow:buffer应该没错~照原厂的protocol 除了一个ZnSO4换Zncl2 04/21 21:36
20F：→ jeffshow:因为实验室只有这种~不过应该没差别这麽大吧? 04/21 21:37
21F：推 yaliu:那我觉得你应该是loading gel量太少所以看不见～ 04/21 23:11
22F：→ yaliu:因为是genome，所以会是smear~当然量多才会看的比较清楚 04/21 23:12
23F：→ jeffshow:load 10 microliter一样也没看到@@ 04/22 13:35
24F：→ boxiaokai:你要做什麽实验? genomic southern? 04/22 13:56
25F：→ boxiaokai:先把实验目的描述清楚会不会比较好抓原因 04/22 14:03
26F：→ boxiaokai:假设你要做genomic southern 就我的经验是要下10ug DNA 04/22 14:04
27F：→ boxiaokai:final volumn 20ul 这样看来你的genomic DNA浓度太低了 04/22 14:06
28F：→ supray:1ug 跑 genomic DNA 会分散成n个片段 一定看不到的啊-.- 04/22 18:56
29F：→ supray:你下的量 是跑plasmid的量 04/22 18:56
30F：→ jeffshow:那要下多少才看的到呢? 04/24 23:47
31F：推 yaliu:你要不要附上电泳图？切之前genomic DNA电泳(量要注明一下) 04/25 01:41
32F：→ yaliu:切之後的电泳图，操作及添加量标示清楚 04/25 01:42
33F：→ yaliu:其实真的很有可能是注入量太低所以看不见啦～或许你final作 04/25 01:45
34F：→ yaliu:用体积减少，或者增加作用的DNA量，尽可能loading多一点 04/25 01:46
35F：→ Realthugz:切之前去跑胶看看 我有遇过很难搞的plasmid 04/25 04:57
36F：→ Realthugz:OD数值跟curve都挺正常 却跟电泳对不起来 PS:我不是新手 04/25 04:58