作者dodomilk (豆漿)
看板Biotech
標題[求救] Ligation前的CIP是必要的嗎？
時間Tue Apr 19 18:04:00 2011
小弟這次作construct用的是EcoRI和BamHI，切出來是sticky end
比較特別的是，EcoRI切出來的AATT和BamHI切出來的GATC，有兩個bp是一樣的
實驗室的人都建議做vector的CIP，請問有沒有人用這兩種restriction enzyme
不做CIP，接下來的ligation也做得很順利的？
謝謝
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◆ From: 140.109.40.39
1F：推 icome:就算不做CIP當然也是做得出來 04/19 18:16
2F：→ icome:不過我的經驗是 加了CIP幾乎不會挑到self-ligation 04/19 18:17
3F：→ icome:所以我都會加 後續挑colony比較愉快 04/19 18:19
4F：→ cloneting:只要RE有切好成功率高 做CIP ligation效率較差 04/19 21:44
5F：→ gryou:感想如i大 真的是有命中率高！ 04/19 22:03
6F：推 conective:除非你都長不出菌落 不然作一下CIP會比較好挑 04/19 22:24
7F：推 musicman:我自己經驗是兩端切位為同一酵素就做CIP 04/19 23:15
8F：→ musicman:如果我是原PO, EcoRI跟BamHI 我就直接ligation了 04/19 23:16
9F：→ nike77114:同樓上~不過我還是不沒做CIP XDDD 04/20 21:37
10F：→ aeroufo:direct ligation不做CIP，Single cut做CIP，所以給原PO建 04/21 14:18
11F：→ aeroufo:議直接ligation就好 04/21 14:18
12F：→ dodomilk:感謝大家的意見 04/21 17:25