作者dodomilk (豆浆)
看板Biotech
标题[求救] Ligation前的CIP是必要的吗？
时间Tue Apr 19 18:04:00 2011
小弟这次作construct用的是EcoRI和BamHI，切出来是sticky end
比较特别的是，EcoRI切出来的AATT和BamHI切出来的GATC，有两个bp是一样的
实验室的人都建议做vector的CIP，请问有没有人用这两种restriction enzyme
不做CIP，接下来的ligation也做得很顺利的？
谢谢
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◆ From: 140.109.40.39
1F：推 icome:就算不做CIP当然也是做得出来 04/19 18:16
2F：→ icome:不过我的经验是 加了CIP几乎不会挑到self-ligation 04/19 18:17
3F：→ icome:所以我都会加 後续挑colony比较愉快 04/19 18:19
4F：→ cloneting:只要RE有切好成功率高 做CIP ligation效率较差 04/19 21:44
5F：→ gryou:感想如i大 真的是有命中率高！ 04/19 22:03
6F：推 conective:除非你都长不出菌落 不然作一下CIP会比较好挑 04/19 22:24
7F：推 musicman:我自己经验是两端切位为同一酵素就做CIP 04/19 23:15
8F：→ musicman:如果我是原PO, EcoRI跟BamHI 我就直接ligation了 04/19 23:16
9F：→ nike77114:同楼上~不过我还是不没做CIP XDDD 04/20 21:37
10F：→ aeroufo:direct ligation不做CIP，Single cut做CIP，所以给原PO建 04/21 14:18
11F：→ aeroufo:议直接ligation就好 04/21 14:18
12F：→ dodomilk:感谢大家的意见 04/21 17:25