作者hdf87ery (hdf87ery)
看板Biotech
標題細胞表現蛋白經過抗生素篩選後沒有產物?
時間Sun Apr 17 13:27:22 2011
我將我的基因CLONE進入PCDNA6 HIS MYC中,並且TRANSFECT
transient方式都可以偵測出產物,但經過抗生素篩選二週就不太能夠偵測到
篩選方式有
POOL方式:不做挑單一菌落的動作,這方式有時能在二週過後還能夠偵測到,但有時也一樣無法偵測出,且隨著時間產物越來越弱
單一菌落方式:有做挑單一菌落的動作,加入抗生素,等待單一菌落生成後以TIP挑到另一WELL中,挑了約24個左右,但也沒有偵測出東西
我試過這二種方式好像都不能使得細胞穩定表現出蛋白
我也換過TAG位置,TAG在N端或C端結果都類似
有前輩可以指導一下嗎,謝謝
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.98.94
1F：推 aceliang:就...掉了阿。繼續挑吧...盡量不要用pooled clone比較好 04/17 14:35
2F：→ hdf87ery:那再請問大約多少顆可以挑出?謝謝 04/17 14:57
3F：推 aceliang:有遇過Tet-on的挑了不下百顆...所以只好改用virus...lol 04/17 19:01