作者hdf87ery (hdf87ery)
看板Biotech
标题细胞表现蛋白经过抗生素筛选後没有产物?
时间Sun Apr 17 13:27:22 2011
我将我的基因CLONE进入PCDNA6 HIS MYC中,并且TRANSFECT
transient方式都可以侦测出产物,但经过抗生素筛选二周就不太能够侦测到
筛选方式有
POOL方式:不做挑单一菌落的动作,这方式有时能在二周过後还能够侦测到,但有时也一样无法侦测出,且随着时间产物越来越弱
单一菌落方式:有做挑单一菌落的动作,加入抗生素,等待单一菌落生成後以TIP挑到另一WELL中,挑了约24个左右,但也没有侦测出东西
我试过这二种方式好像都不能使得细胞稳定表现出蛋白
我也换过TAG位置,TAG在N端或C端结果都类似
有前辈可以指导一下吗,谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.98.94
1F：推 aceliang:就...掉了阿。继续挑吧...尽量不要用pooled clone比较好 04/17 14:35
2F：→ hdf87ery:那再请问大约多少颗可以挑出?谢谢 04/17 14:57
3F：推 aceliang:有遇过Tet-on的挑了不下百颗...所以只好改用virus...lol 04/17 19:01