作者ververia (假面下的冷漠與哀愁)
看板Biotech
標題[求救] western總是跑出兩條band
時間Fri Apr 15 16:28:43 2011
使用的細胞是 THP-1 cells
目的是看藥品能否抑制刺激物誘導 THP-1 cell產生的 MMP-9
不過從開始做到現在每次都會跑出兩條band
(因為 MMP-9 和 b-actin 的距離蠻遠，所以會在加一抗的時候裁成兩半)
照片
http://tinyurl.com/3byyuco
跑電泳會跑 1.5 個小時，先用 100V 跑過上膠，之後再用 120V 跑完
有試過縮短 15 分鐘，band之間感覺很接近，但還是看得出兩條
因為學姐剛買的時候跑過一次，只有一條band
借另外的同學實驗，雖然是不同細胞，但也是只跑出一條
所以自己覺得應該不是抗體有問題
問廠商得到的回應是有可能二抗抓到其他的protein
想請問板上有經驗的板友會跑出兩條band可能的原因
是不是有什麼實驗的細節是我疏忽的？
謝謝~
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◆ From: 140.122.74.27
1F：推 celestial318:我也覺得是二抗 你可以再把兩條band確認看看開一點 04/15 17:21
2F：→ celestial318:跑開一點確認= = 04/15 17:21
3F：推 bider:下次跑膠把學姊或你同學的當做control吧 loading在同一片膠 04/15 17:47
4F：→ gryou:會不會是妳的抗體可以抓到MMP9&pro-MMP9? 04/15 18:44
5F：→ machin:推樓上~XD 04/22 21:51