作者ververia (假面下的冷漠与哀愁)
看板Biotech
标题[求救] western总是跑出两条band
时间Fri Apr 15 16:28:43 2011
使用的细胞是 THP-1 cells
目的是看药品能否抑制刺激物诱导 THP-1 cell产生的 MMP-9
不过从开始做到现在每次都会跑出两条band
(因为 MMP-9 和 b-actin 的距离蛮远，所以会在加一抗的时候裁成两半)
照片
http://tinyurl.com/3byyuco
跑电泳会跑 1.5 个小时，先用 100V 跑过上胶，之後再用 120V 跑完
有试过缩短 15 分钟，band之间感觉很接近，但还是看得出两条
因为学姐刚买的时候跑过一次，只有一条band
借另外的同学实验，虽然是不同细胞，但也是只跑出一条
所以自己觉得应该不是抗体有问题
问厂商得到的回应是有可能二抗抓到其他的protein
想请问板上有经验的板友会跑出两条band可能的原因
是不是有什麽实验的细节是我疏忽的？
谢谢~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.122.74.27
1F：推 celestial318:我也觉得是二抗 你可以再把两条band确认看看开一点 04/15 17:21
2F：→ celestial318:跑开一点确认= = 04/15 17:21
3F：推 bider:下次跑胶把学姊或你同学的当做control吧 loading在同一片胶 04/15 17:47
4F：→ gryou:会不会是你的抗体可以抓到MMP9&pro-MMP9? 04/15 18:44
5F：→ machin:推楼上~XD 04/22 21:51