作者brume1026 (蒼之濤)
看板Biotech
標題[求救] HeLa cell 在 transfection時 一直有汙染的狀況!
時間Tue Apr 12 21:20:50 2011
不好意思
想請教養HeLa cell的大大
剛到新實驗室 接手前人的細胞做
事情是這樣子的
我要transfect plasmid進去HeLa cell跟HEK293T 這二株細胞
(我們實驗室用的是Lipofectamine 2000)
在同樣的條件下
早上大約10點進行實驗
隔天要收細胞做實驗時 卻發現HeLa cell有汙染的情形
(有白白 像細沙的東西)
HEK293T 卻沒有被汙染
(能排除所有reagents的問題?!)
之後我從新解凍之前助理所凍的HeLa cell
一開始我就用DMEM+10%FBS 沒有加抗生素去培養 (4/8)
4/11回來繼代細胞 看它也都好好的 沒有汙染
(在我用trypsin去切的時候 5分鐘後 細胞還是切不太下來!! 之後就給它再切2分鐘)
所以我就順便seeding cell 隔天做transfection的實驗
早上看細胞 也是沒汙染的情形
今天早上10點左右做完
下午離開實驗時前 卻發現它汙染了= =
(汙染速度好快! 也是白白濁濁的)
跟上次同樣的reagents
想請教的是為什麼會發生這種現象?!
會是細胞本身有問題嗎?! 還是有其他可能的原因呢?!
我想的解決方法以及可能的原因是:
1.就是在種細胞 分別加入 OPTI-MEM、Lipofeatamine、plasmid以及 DMEM only做檢測
2.利用 microplasma kit去檢測
還有其他解決方法嗎?!
請大大們賜教囉 感恩^^
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◆ From: 219.85.195.117
1F：推 liuse:1的方法不錯 可以找到污染源 04/12 21:56
2F：推 jamesonly:Lipo2000印象中是用P/S FREE的DMEM 04/13 03:03
3F：→ jamesonly:之前做過發現是TM出問題... 04/13 03:04
4F：推 jamesonly:操作部分也要注意一下~先用1做做看，之前也這樣做 04/13 03:06
5F：推 HEK293:跟mycoplasma關係不大吧 04/13 08:53
6F：→ alicialai:WOW!! Hela trypsin 5min!! so cool! 04/13 20:48
7F：→ alicialai:我家Hela Trpsin頂多1min就拍下來了說~~ 04/13 20:49
8F：推 abcam:有沒有 可能是Lipofetamine的問題? 04/13 21:47