作者brume1026 (苍之涛)
看板Biotech
标题[求救] HeLa cell 在 transfection时 一直有污染的状况!
时间Tue Apr 12 21:20:50 2011
不好意思
想请教养HeLa cell的大大
刚到新实验室 接手前人的细胞做
事情是这样子的
我要transfect plasmid进去HeLa cell跟HEK293T 这二株细胞
(我们实验室用的是Lipofectamine 2000)
在同样的条件下
早上大约10点进行实验
隔天要收细胞做实验时 却发现HeLa cell有污染的情形
(有白白 像细沙的东西)
HEK293T 却没有被污染
(能排除所有reagents的问题?!)
之後我从新解冻之前助理所冻的HeLa cell
一开始我就用DMEM+10%FBS 没有加抗生素去培养 (4/8)
4/11回来继代细胞 看它也都好好的 没有污染
(在我用trypsin去切的时候 5分钟後 细胞还是切不太下来!! 之後就给它再切2分钟)
所以我就顺便seeding cell 隔天做transfection的实验
早上看细胞 也是没污染的情形
今天早上10点左右做完
下午离开实验时前 却发现它污染了= =
(污染速度好快! 也是白白浊浊的)
跟上次同样的reagents
想请教的是为什麽会发生这种现象?!
会是细胞本身有问题吗?! 还是有其他可能的原因呢?!
我想的解决方法以及可能的原因是:
1.就是在种细胞 分别加入 OPTI-MEM、Lipofeatamine、plasmid以及 DMEM only做检测
2.利用 microplasma kit去检测
还有其他解决方法吗?!
请大大们赐教罗 感恩^^
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 219.85.195.117
1F：推 liuse:1的方法不错 可以找到污染源 04/12 21:56
2F：推 jamesonly:Lipo2000印象中是用P/S FREE的DMEM 04/13 03:03
3F：→ jamesonly:之前做过发现是TM出问题... 04/13 03:04
4F：推 jamesonly:操作部分也要注意一下~先用1做做看，之前也这样做 04/13 03:06
5F：推 HEK293:跟mycoplasma关系不大吧 04/13 08:53
6F：→ alicialai:WOW!! Hela trypsin 5min!! so cool! 04/13 20:48
7F：→ alicialai:我家Hela Trpsin顶多1min就拍下来了说~~ 04/13 20:49
8F：推 abcam:有没有 可能是Lipofetamine的问题? 04/13 21:47