作者waitingu (Phil-Ku)
看板Biotech
標題[討論] 該如何讓細胞的訊息傳遞位於low level~
時間Tue Apr 12 17:38:28 2011
最近在做訊息傳遞方面的實驗
希望能在加入FBS後看到細胞內RTK磷酸化程度增加，以及下游的訊息傳遞路徑有
Time-course的變化
一開始的流程大概是先將細胞放在FBS free的medium中 O/N
之後加入FBS，再計算時間收取蛋白跑WB
但卻很奇怪的發現，一直維持在FBS free的那組細胞，其RTK磷酸化程度比加入FBS後
30 mins、1 hour還高，重複幾次都是這樣
而其下游的訊息傳遞蛋白，例如Src、Akt等也都有類似的現象
因此想請問各位版友，有沒有過類似的情況呢？
如果需要看induce起來的現象，該如何讓細胞的訊息傳遞處於low level的狀態？
(看來用FBS free的medium似乎不是正解)
當然starvation與signal transduction不是同一件事情，但這實在是讓我百思不得其解
感謝大家的意見與討論^^
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
1F：推 icome:是什麼細胞? 有些細胞會受hormone刺激 要用charcoal-treated 04/13 17:19
2F：→ icome:的medium和FBS 例如乳癌和攝護腺細胞 04/13 17:20
3F：→ waitingu:目前是用HEK293細胞 04/14 16:05
4F：→ icome:=.= 那就不清楚了 可能是細胞有問題? 建議用低代數的細胞 04/17 10:55
5F：→ waitingu:感謝樓上 已經重新解凍stable clone 希望能有好結果XDD 04/19 12:17