作者im9527tw (妮)
看板Biotech
標題[方法] FLOW抗體
時間Mon Apr 11 00:55:06 2011
請問一下
上FLOW的抗體如果是需要另外接2抗的
有版友知道詳細步驟該怎麼做嗎?
我之前是1抗2抗一起加,染色30分鐘
(說明書上都不會寫時間,所以我都是以以前染色經驗去做的)
原本是希望結果能有不同比例陽性跟陰性2個peak
但通常有染色的那管都是peak完全偏移
沒出現第2個peak
這樣分析出來的結果,陽性率都很高Orz
但參照ref,通常陽性率不會那麼高
所以想請問有經驗的板友
可以說說步驟嗎?
謝謝~
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◆ From: 58.114.177.243
1F：推 robinduck:先染biotin-layed的抗體再染streptavidin接螢光的抗體 04/11 06:42
2F：→ robinduck:也就是1抗2抗分開染，我會各染20min吧！ 04/11 06:44
3F：→ mzac1b:按理說 任何染色都不能一二抗同時加 那會減低染色效率 04/11 14:15
4F：→ mzac1b:一抗先染完後 清洗乾淨 離心 再下二抗 04/11 14:17
5F：→ thai772:我的經驗是一抗一個半小時，反應完先離心，抽掉上清液 04/15 11:22
6F：→ thai772:再加入二抗反應一個半小時，抗體反應時都在慢速的shaker上 04/15 11:24
7F：→ thai772:我都是放在4度C冰箱，記得二抗要避光喔 04/15 11:25