作者im9527tw (妮)
看板Biotech
标题[方法] FLOW抗体
时间Mon Apr 11 00:55:06 2011
请问一下
上FLOW的抗体如果是需要另外接2抗的
有版友知道详细步骤该怎麽做吗?
我之前是1抗2抗一起加,染色30分钟
(说明书上都不会写时间,所以我都是以以前染色经验去做的)
原本是希望结果能有不同比例阳性跟阴性2个peak
但通常有染色的那管都是peak完全偏移
没出现第2个peak
这样分析出来的结果,阳性率都很高Orz
但参照ref,通常阳性率不会那麽高
所以想请问有经验的板友
可以说说步骤吗?
谢谢~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 58.114.177.243
1F：推 robinduck:先染biotin-layed的抗体再染streptavidin接萤光的抗体 04/11 06:42
2F：→ robinduck:也就是1抗2抗分开染，我会各染20min吧！ 04/11 06:44
3F：→ mzac1b:按理说 任何染色都不能一二抗同时加 那会减低染色效率 04/11 14:15
4F：→ mzac1b:一抗先染完後 清洗乾净 离心 再下二抗 04/11 14:17
5F：→ thai772:我的经验是一抗一个半小时，反应完先离心，抽掉上清液 04/15 11:22
6F：→ thai772:再加入二抗反应一个半小时，抗体反应时都在慢速的shaker上 04/15 11:24
7F：→ thai772:我都是放在4度C冰箱，记得二抗要避光喔 04/15 11:25