除了以上大大補充的 我覺得以PCR產物純化來說 若只是 "酒精沉澱" 的確是單純用來去除 PCR buffer 等鹽類環境 但以上有偷懶的成分在 XD 通常還是會跑個膠...切膠來做純化 好處有兩個 1.去除雜 band 2.去除template 第二點我個人認為是滿重要的 只要一點點量的 intact plasmid 就很大機會被直接 transform 也就容易挑到自接 至於為什麼 ligation 產物不純化 通常 final 接的環境會控制在 10~15 ul 左右 (聽說體積越高碰撞機率越低這樣) 這種體積做純化技術不好東西很容易就被純丟了 沒有必要冒這個風險... 而且做得好的話不用取太多去 transform 也 ok 如果是用電的方法送入 取太多去送的話 嗯...會電爆 基本上鹽濃度真正有影響是在這個地方 結論是 反正還有 heat shock ...XDDD ※ 引述《smilegirl24 (susu)》之銘言： : 最近在上生物技術的實驗課 : 從PCR→DNA purification→enzyme cutting→DNA ligation→transformation : 目前學到這裡 : 覺得很好奇 從PCR到限制酵素切割 需要經過DNA純化 : 原因是因為要讓從PCR的環境 : 轉變成適合限制酵素切割的環境 : 故要經過DNA純化 : (這樣說有錯嗎?) : 那為什麼在做transformation之前沒有做純化的步驟呢? : 利用ligation後未純化的mixed DNA不會影響後面要計算的轉殖效率嗎? : 若將plate放太久，是什麼原因造成衛星現象? : 我是初學者 很多都不懂 請大家幫我解答一下!! : 感激不盡 > < --

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