作者: even2300471 (pheaseat) 看板: Biotech
標題: [求救] site-directed mutagenesis做不出來
時間: Thu Mar 31 15:28:07 2011
這次實驗一共要做五種mutant
mutate的位置都是一樣的
所有實驗都是一起進行
結果其中四組都做出來了
最後一組重複了三次在ampicillin-agar plate上仍然沒有長任何colony
五組使用的enzyme, buffer等等理論上都是一樣的
卻獨獨這組做不出來
不曉得有沒有人能提供經驗可能的原因是什麼
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.55.237
1F：→ Rinehot:你PCR完有沒有跑膠? 確認一下有沒有P到東西吧 03/31 16:01
2F：→ even2300471:protocol上說 因為產物量太少 跑膠可能看不到band 03/31 17:25
3F：→ even2300471:但並不代表就沒有東西... 所以感覺跑膠意義不大? 03/31 17:26
4F：→ williamyang:我做的話會跑膠,而且會有band說... 03/31 18:33
5F：推 icome:primer可能剛好有2級結構吧 不然沒道理只有它做不出 03/31 20:54
6F：→ icome:我之前經驗是 pfu與competent cell效率蠻重要 03/31 20:58
7F：→ icome:試試看commercial的competent cell 03/31 20:59
8F：→ even2300471:我用的的確是commercial competent cell沒錯 04/01 16:22
※ 編輯: even2300471 來自: 140.112.4.192 (04/01 16:25)
9F：推 bluecsky:會跑一下 但是沒有band一樣會繼續做XD 因為真的量不多 04/01 16:51
10F：→ bluecsky:另外這狀況最直接的想法就是primer有問題吧 04/01 16:51
11F：→ bluecsky:之前卡過一次卡了兩個月 reorder primer後做一次就出來 04/01 16:52
12F：→ bluecsky:因為你有其他組同時做 等於已經幫你確認buff pfu跟cell 04/01 16:53
13F：→ bluecsky:應該沒有大問題 所以檢查看看primer吧 04/01 16:53
14F：→ even2300471:感謝 我的想法其實跟樓上一樣... 04/02 20:08
15F：→ ganbaol:除了step2 annealing才不會做跑膠 check,不然還是會做 04/04 14:39
16F：→ ganbaol:產物應該是看的到吧 Q.Q 04/04 14:39
17F：→ ganbaol:不過照你敘述 也覺得是 primer 有問題 +1 04/04 14:40
18F：推 sinmam:有跑膠比較看看PCR與nonPCR的band有不同嗎? 04/09 02:12