作者: even2300471 (pheaseat) 看板: Biotech
标题: [求救] site-directed mutagenesis做不出来
时间: Thu Mar 31 15:28:07 2011
这次实验一共要做五种mutant
mutate的位置都是一样的
所有实验都是一起进行
结果其中四组都做出来了
最後一组重复了三次在ampicillin-agar plate上仍然没有长任何colony
五组使用的enzyme, buffer等等理论上都是一样的
却独独这组做不出来
不晓得有没有人能提供经验可能的原因是什麽
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.55.237
1F：→ Rinehot:你PCR完有没有跑胶? 确认一下有没有P到东西吧 03/31 16:01
2F：→ even2300471:protocol上说 因为产物量太少 跑胶可能看不到band 03/31 17:25
3F：→ even2300471:但并不代表就没有东西... 所以感觉跑胶意义不大? 03/31 17:26
4F：→ williamyang:我做的话会跑胶,而且会有band说... 03/31 18:33
5F：推 icome:primer可能刚好有2级结构吧 不然没道理只有它做不出 03/31 20:54
6F：→ icome:我之前经验是 pfu与competent cell效率蛮重要 03/31 20:58
7F：→ icome:试试看commercial的competent cell 03/31 20:59
8F：→ even2300471:我用的的确是commercial competent cell没错 04/01 16:22
※ 编辑: even2300471 来自: 140.112.4.192 (04/01 16:25)
9F：推 bluecsky:会跑一下 但是没有band一样会继续做XD 因为真的量不多 04/01 16:51
10F：→ bluecsky:另外这状况最直接的想法就是primer有问题吧 04/01 16:51
11F：→ bluecsky:之前卡过一次卡了两个月 reorder primer後做一次就出来 04/01 16:52
12F：→ bluecsky:因为你有其他组同时做 等於已经帮你确认buff pfu跟cell 04/01 16:53
13F：→ bluecsky:应该没有大问题 所以检查看看primer吧 04/01 16:53
14F：→ even2300471:感谢 我的想法其实跟楼上一样... 04/02 20:08
15F：→ ganbaol:除了step2 annealing才不会做跑胶 check,不然还是会做 04/04 14:39
16F：→ ganbaol:产物应该是看的到吧 Q.Q 04/04 14:39
17F：→ ganbaol:不过照你叙述 也觉得是 primer 有问题 +1 04/04 14:40
18F：推 sinmam:有跑胶比较看看PCR与nonPCR的band有不同吗? 04/09 02:12