作者bbiioo (梅子)
看板Biotech
標題[求救] qPCR無產物
時間Mon Mar 28 23:02:07 2011
我的實驗流程如下
取小鼠全血→分別利用kit及trizol方法抽取RNA→用SuperScript® III
Reverse Transcriptase進行RT-PCR→將得到的cDNA進行qPCR
除了在抽RNA時用兩種方式抽之外 其他皆一樣步驟
遇到的問題是 使用trizol方法抽取出的RNA 最後qPCR可得到產物
而 用kit方法抽取出的RNA 最後qPCR 完全沒有產物的存在..
所抽出的RNA皆有跑膠確認及測260/280 確定是可以的才往下作
卻最後一步出錯
想問問版上的高手
這樣有可能在哪邊出錯? 謝謝!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 125.224.0.72
1F：推 aceliang:用什麼primer? 03/29 00:08
2F：→ iceking:除了抽RNA用兩種方式抽之外,其他都一樣,那就是RNA的問題 03/29 09:42
3F：→ bbiioo:primer就是目標基因的primer.. 03/29 20:46
4F：→ bbiioo:RNA哪邊的問題 都有抽出來.. 03/29 20:47
5F：→ skyken10:會不會你設計的primer是在intron上~換poly-T的primer試試 03/30 00:22
6F：→ bbiioo:Primer確定過沒問題 03/30 20:53
7F：→ ssds:會不會是p到genomic dna,primer有過intron嗎,QPCR產物 04/01 19:56
8F：→ ssds:可以跑膠或sequence確認一下,因為kit有附Dnase 04/01 19:57