作者bbiioo (梅子)
看板Biotech
标题[求救] qPCR无产物
时间Mon Mar 28 23:02:07 2011
我的实验流程如下
取小鼠全血→分别利用kit及trizol方法抽取RNA→用SuperScript® III
Reverse Transcriptase进行RT-PCR→将得到的cDNA进行qPCR
除了在抽RNA时用两种方式抽之外 其他皆一样步骤
遇到的问题是 使用trizol方法抽取出的RNA 最後qPCR可得到产物
而 用kit方法抽取出的RNA 最後qPCR 完全没有产物的存在..
所抽出的RNA皆有跑胶确认及测260/280 确定是可以的才往下作
却最後一步出错
想问问版上的高手
这样有可能在哪边出错? 谢谢!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 125.224.0.72
1F：推 aceliang:用什麽primer? 03/29 00:08
2F：→ iceking:除了抽RNA用两种方式抽之外,其他都一样,那就是RNA的问题 03/29 09:42
3F：→ bbiioo:primer就是目标基因的primer.. 03/29 20:46
4F：→ bbiioo:RNA哪边的问题 都有抽出来.. 03/29 20:47
5F：→ skyken10:会不会你设计的primer是在intron上~换poly-T的primer试试 03/30 00:22
6F：→ bbiioo:Primer确定过没问题 03/30 20:53
7F：→ ssds:会不会是p到genomic dna,primer有过intron吗,QPCR产物 04/01 19:56
8F：→ ssds:可以跑胶或sequence确认一下,因为kit有附Dnase 04/01 19:57