作者euphonium15 (心動夢幻)
看板Biotech
標題Re: [實驗] 電泳膠體的製備
時間Fri Mar 25 16:34:43 2011
※ 引述《soom ()》之銘言：
: ※ 引述《euphonium15 (心動夢幻)》之銘言：
: : 上網查了一些資料~發現似乎跟跑電泳用的膠體類似~
: : 根據文獻~原PO使用了下面的步驟:
: : 1. 25mL 15% Acrylamide+7.5mL 0.3% Agarose+ 17.5mL DI Water當stock solution.
: : 2. 取10mL stock solution加入70uL Ammonium persulfate以及20uL TEMED充分混合.
: : 3. 裝入holder後,迅速放入約40度左右的烘箱約60分鐘.
: 你的膠體最終濃度是7.5%左右，這個濃度純acrylamide的0.5 mm膠會真的蠻軟的
: 不過應該還是會凝，而不是膠水狀
: 應該是不會因為廠牌差很多，倒是跟藥品的年紀有點關係
: Ammonium persulfate現配的效果會比較好，TEMED如果放很久了效果也會有差
: 這兩個多加會比較快凝，但不建議加太多
: 跟容器的形狀應該不會有太大關係，因為我配膠時剩餘的膠液放在燒杯裡也會凝
: 更何況1mm跟1.5mm都是很常用的acrylamide膠厚度
: 有聽說有人是配完後放進微波爐烤一兩分鐘就凝了，不過我一直沒膽這樣做
: 而且你的配方裡有agarose，我不確定太熱會不會有影響
: 最後，貴校生科系會做的人不少，也有專門用來做電泳膠的容器，不妨直接找他們
: 討論甚至是請他們指導，應該會更有幫忙才對。
謝謝您的建議,老實說我參考的文獻配製方法沒有說明的很清楚,內文如下:
A polyacrylamide hydrogel comprising 15% by volume acrylamide (Boehringer)
and 0.3% by volume AcrylAide agarose cross-linker (Flow Gen Instruments Ltd.)
was used throughout this work as the diffusive gel layer.
For 10 mL of gel solution, 70 uL of freshly prepared ammonium persulfate
initiator (10%) and 20 uL of TEMED catalyst were added.
The solution was immediately cast between two glass plates separated by
plastic spacers and allowed to set at a temperature of 40 ±5 C.
The setting time of typically 45 min is controlled by the temperature
and the concentration of initiator and catalyst.
內文完全沒有說到15% Acrylamide以及0.3% Agarose需要加多少量使用.
我是在作者約4年後發的另外一篇文獻上面找到了Acrylamide以及Agarose的用量.
不過那篇文獻使用的是30% Acrylamide以及2% Agarose,不知是不是關鍵點.
理論上做完之後應該會像隱形眼鏡那種感覺,薄薄的一片可以夾起來.
另外附帶一提,為了做這個實驗,所有藥品都是新買而APS都是現配現做.
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◆ From: 140.114.45.130
※ 編輯: euphonium15 來自: 140.114.45.130 (03/25 16:37)
1F：→ soom:這樣寫應該是指最終濃度acrylamide 15%, aga 0.3% 03/25 17:22
2F：推 Ianthegood:不是一般的agarose吧 03/25 21:33