※ 引述《soom ()》之铭言： : ※ 引述《euphonium15 (心动梦幻)》之铭言： : : 上网查了一些资料~发现似乎跟跑电泳用的胶体类似~ : : 根据文献~原PO使用了下面的步骤: : : 1. 25mL 15% Acrylamide+7.5mL 0.3% Agarose+ 17.5mL DI Water当stock solution. : : 2. 取10mL stock solution加入70uL Ammonium persulfate以及20uL TEMED充分混合. : : 3. 装入holder後,迅速放入约40度左右的烘箱约60分钟. : 你的胶体最终浓度是7.5%左右，这个浓度纯acrylamide的0.5 mm胶会真的蛮软的 : 不过应该还是会凝，而不是胶水状 : 应该是不会因为厂牌差很多，倒是跟药品的年纪有点关系 : Ammonium persulfate现配的效果会比较好，TEMED如果放很久了效果也会有差 : 这两个多加会比较快凝，但不建议加太多 : 跟容器的形状应该不会有太大关系，因为我配胶时剩余的胶液放在烧杯里也会凝 : 更何况1mm跟1.5mm都是很常用的acrylamide胶厚度 : 有听说有人是配完後放进微波炉烤一两分钟就凝了，不过我一直没胆这样做 : 而且你的配方里有agarose，我不确定太热会不会有影响 : 最後，贵校生科系会做的人不少，也有专门用来做电泳胶的容器，不妨直接找他们 : 讨论甚至是请他们指导，应该会更有帮忙才对。 谢谢您的建议,老实说我参考的文献配制方法没有说明的很清楚,内文如下: A polyacrylamide hydrogel comprising 15% by volume acrylamide (Boehringer) and 0.3% by volume AcrylAide agarose cross-linker (Flow Gen Instruments Ltd.) was used throughout this work as the diffusive gel layer. For 10 mL of gel solution, 70 uL of freshly prepared ammonium persulfate initiator (10%) and 20 uL of TEMED catalyst were added. The solution was immediately cast between two glass plates separated by plastic spacers and allowed to set at a temperature of 40 ±5 C. The setting time of typically 45 min is controlled by the temperature and the concentration of initiator and catalyst. 内文完全没有说到15% Acrylamide以及0.3% Agarose需要加多少量使用. 我是在作者约4年後发的另外一篇文献上面找到了Acrylamide以及Agarose的用量. 不过那篇文献使用的是30% Acrylamide以及2% Agarose,不知是不是关键点. 理论上做完之後应该会像隐形眼镜那种感觉,薄薄的一片可以夹起来. 另外附带一提,为了做这个实验,所有药品都是新买而APS都是现配现做. --

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