作者xenosaga1026 (sam)
看板Biotech
標題[求救] 利用IP-->Mass 的方式探討protein-protein interaction
時間Wed Mar 23 23:40:04 2011
各位大大好
不知道有沒有人做過
將culture cell內的某protein IP下來
然後上Mass (shotgun proteomics)
來看哪些protein與某protein有interaction呢?
小弟目前求助無門
有以下疑惑
1.將protein IP下來後不知道要選哪種elution buffer較適合後面上質譜儀?
目前已知有
1.Glycin (pH 2)
2.1%SDS
3.Urea
2.Cell的量要多嗎?
3.建議上哪種質譜儀呢? LC-tandem-MS or MALDI-TOF?
希望有經驗的大大可以分享經驗QQ
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.24.71.164
1F：推 jethuang:如果是做LC/MS,protein抓下來之後直接送去打應該可以!! 03/29 15:37
2F：→ jethuang:但MALDI-TOF不太清楚,你可以問幫你做分析的人! 03/29 15:38
3F：→ jethuang:我自己是做CO-IP之後跑2D所以沒有這樣的困惱><" 03/29 15:39
4F：推 inchew:你的東西不夠純的話:LC/MS(Maldi-TOF需要夠純)，細節問題 04/06 18:57
5F：→ inchew:建議直接寫信請教相關實驗室，或是直接問未來送LC/MS的單位 04/06 18:59
6F：→ inchew:可以收穫很多，他們有時也會給你建議或策略 04/06 18:59
7F：推 greendeer:你要先決定要做in gel 還是 in solution digestion 04/05 22:18
8F：→ greendeer:如果是in gel就要先跑膠，再挖band。in solution的話， 04/05 22:19
9F：→ greendeer:我建議你問相關實驗室 04/05 22:19