作者rickkao11 (rickkao11)
看板Biotech
標題[求救] ligation 的正接反接
時間Wed Mar 23 17:44:19 2011
請問一下大家ligation 的問題
我的insert用EcoR1切一刀，vector也是一樣處理
在ligation時,有可能出現正接會反接的情況
後來進行transformation，是不是會出現同一個E.coli中同時有正接和反接的plasmid ?
請問大家要如何處理這個問題
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
1F：→ luke12182006:想了一下...這個問題應該不存在 03/23 17:54
請問為什麼呢？
※ 編輯: rickkao11 來自: 140.112.121.97 (03/23 17:57)
2F：→ williamyang:若是這情形的話,那大家都不用挑single colony了 03/23 19:29
3F：→ yaprint:colony是來自同一顆菌增殖的吧 03/23 19:50
4F：→ rickkao11:謝謝您的回答 03/23 21:00
5F：→ chvkimo:我怎麼覺得這樣回答怪怪的, 我認為要問的問題應該是=> 03/24 00:44
6F：→ chvkimo:為什麼 一隻菌只會有一種 plasmid存在 ,不過剛看下面有回 03/24 00:45
7F：→ chvkimo:文了, 至於最終原因我也不太清楚~ 03/24 00:46
8F：推 Ianthegood:不然就想辦法切兩刀唄 03/24 16:50
9F：→ ganbaol:始終覺得單一切位很難接,容易自接,因為我討厭加cip :( 03/24 18:54
10F：→ skyken10:請問樓上G大~為啥不喜歡Cip呀~單純好奇~^^ 03/25 11:24
11F：推 yaliu:我也討厭加CIP~~麻煩然後有時後會CIP不完全～感覺CIP這一步 03/25 12:21
12F：→ yaliu:好抽象阿～～ 03/25 12:22
13F：→ soom:怕不完全的話可以多加幾次CIP做久一點 03/25 15:35
14F：→ ganbaol:CIP會把我的DNA.....吃掉.....曾經發生過的囧事.... 03/25 21:27
15F：→ ganbaol:而且多做一步純化.感覺內容物會越複雜? 只是感覺的問題... 03/25 21:29